A.

MatTek社のガラスボトムディッシュはコートなし及びポリリジンあるいはコラーゲンでコートしたものがあります。全てのディッシュはガンマ線滅菌されています。
一般的な使用方法は次の通りです。
１．無菌状態の保持：無菌環境（ラミナーフローフードなど）でディッシュを開封してください。
２．平衡にした(Pre-equilibrate)ディッシュの作り方：細胞培地をいれて養生する。 　　
２－３mＬの培地をとって３５ｍｍのディッシュに、３－４mＬを５０ｍｍのディッシュに 入れて15分間３７℃で養生する。　
３．マイクロウエルに細胞懸濁液を添加する：細胞培地と細胞をガラス面にとる。 　
アスピレーションで細胞培地を取り除き、細胞懸濁液（細胞培地の浮遊細胞）を２５０μLとって１０ｍｍのマイクロウェルに、５００μLを１４ｍｍマイクロウェルに、1mlを20mmのマイクロウェルに入れる。ディッシュを1時間３７℃で養生する。
４．培地の追加：1時間後、ディッシュを培地でゆっくり埋める。 　　
３５ｍｍディッシュには２－３mＬを５０ｍｍディッシュには３－４mＬを添加。

※注意：細胞をガラスの表面に密着させた初めの一時間は蒸発を最小限に抑えるためと浸透圧の変化を避けるために適した高さまでディッシュを満たしていることが重要になります。

A.

使用しようとしている細胞に、コートなし、ポリ-ｄ-リジンコート、コラーゲンコートのどのタイプのガラスボトムディッシュが最適か予想することは容易ではありません。
多くの変形した細胞或いはがん細胞はコートなしのディッシュで成長します。
ポリ-ｄ-リジンコートは神経系細胞や一次細胞の培養によく使用されますが、コラーゲンコートを好む細胞もあります。
また、研究者によってはコートなしのディッシュを自分で好みのコーティングをする人もいます。
検索エンジンで観察しようとしている細胞に合ったディッシュを検索するのも一法です。

A.

MatTek社ではガラスボトムディッシュの使用方法を提示した何百もの文献を収集してきました。
必要な文献はMatTek社のWebサイトにおいて収集されたデータベースより検索することが出来ます。
文献にMatTekのディッシュのタイプが明記してない場合は、コートなしのディッシュすなわち P35G-1.5-14-C, P50G-1.5-30-Fなどが使用されると考えてよいでしょう。

A.

ポリ-d-リジンやコラーゲンコートはたいていの場合うまく行きますが、独自のコーティングが必要な場合もあります。
これには、コートなしのディッシュに次のようにＨＣlで前処理をして好みのコーティングを行います。
１．無菌状態で１NのHClを２５０μLとってコートなしの測定ホール１０ｍｍディッシュに、５００μLとってコートなしの測定ホール１４ｍｍディッシュに、1mlとって20mmディッシュにいれます。
２．１５分後、ＨＣlを洗浄して、3回リン酸バッファー（PBS）でディッシュを洗浄し、さらに2回、超純水で洗浄します。
３．好みのコーティングをします。
４．同様の量の細胞培地（ガラスボトムディッシュの基本的な使い方　2を参照）をディッシュにいれてガラスの表面を平衡(pre-equilibrate)するために細胞を塗ります。３７℃で１５分間養生します。

A.

グリッド付のカバーガラスの使用目的は、特定の細胞を時間を追って追跡するために使用されます。例えば、個々の細胞をマイクロインジェクトして、インキュベーターに戻し、一定の時間ごとに観察をすると、グリッドに独特なアルファベットと数字座標が示してあるので、各細胞の変化が認識できます。グリッドにはBellco Glass社のカバースリップ（gridded Bellco Glass）が使用されています。グリッド付の標準的なカバースリップの品番は、P35G-1.5-14-CGRD と P50G-1.5-14-FGRDです。



グリッドサイズ：P35G-1.5-14-CGRID とP50G-1.5-14-FGRIDのグリッドは、独特のアルファベットと数字からなる番号がついた５２０個のマス（升目）からできています。
各マスの大きさは６００μm x ６００μmで線の太さは２０μmです。

グリッドの視覚化 :グリッドは10倍の明視野対物レンズで容易に観察することが出来ます。
対象の細胞を観察するためにより高い倍率に切り替えたり蛍光対物レンズを使用することも出来ます。
しかし、グリッドはこの高倍率のままでは、又は蛍光対物レンズでは観ることが出来ません。

グリッドが見えなくなったら :細胞の Confluent monolayer (単分子層) は概して成長によりグリッドを覆ってしまう為に、グリッドをみる事が困難か又は不可能です。
もしも細胞が成長し重なり合ってグリッドが見えなくなるようなら Part # P-35G-1.5-14-CGRD-D
を使用して、グリッドがディッシュの外側に印字されたものを使用してください。
そうすればカバーガラス上で成長する細胞に影響される事はありません。
このディッシュを使用する場合は、対象の細胞をセットしてカバースリップの底側に焦点を合わせるように調整してください。

CLEM :光-電子相関観察（Correlative light electron microscopy:CLEM) ）： P35G-1.5-14-CGRDガラスボトムディッシュはCLEMに適していますが、P35G-1.5-14-CGRD-Dは細胞とグリッドが異なる焦点面にあるため、CLEMにはお勧めできません。

A.

ガラスボトムディッシュの再使用はお勧めしません。
細胞が培養された際の物質がガラスの表面に残り細胞組織と機能に微妙な影響を及ぼします。
再使用のディッシュは実験中に管理出来ない諸々の症状を生じさせて研究の妨げになります。
マテックのガラスボトムディッシュは一度限りの実験用です。

A.

a. 一番の利点は一つのプレート上において同じ環境下で6.12.24.48.96の培養を一度に行うことが出来る。ハイスループット・ハイコンテントスクリーニングに最適である。
ｂ．マルチウェルプレートを使って分析することは一つのプレート上で複数のウェルを一度に操作が出来るために合理的である。
c. いくつかのアプリケーションを操作するのに細胞の処理（例えば照射など）がマルチウェルプレートを使うと簡素化することが出来る。
ｄ. マルチウェルプレートの小さなウェルでは少量の貴重なサンプルを取り扱うアプリケーションには最適である。

A.

はい、できます。しかし、たいていの場合は取り外すことなく細胞が観察できます。

長期保存など、もしカバースリップの取り外しが必要な場合は、次のようにしてください。
１．品番PDCF OS 30を用意する。
２．ディッシュの蓋を逆さまにする。
３．１mＬのPDCF OS 30を逆さにした蓋にとる。
４．ディッシュの底を蓋に入れる。カバースリップに溶液が触れていることを確認する。
５．ディッシュを液につけたまま室温で４５分間放置する。
６．カバースリップの底をペーパータオルで拭いて乾かす。
７．ディッシュをきれいな所に置いて、ピンセットでカバースリップの端を押してディッシュから取り外す。
注：　上記の方法に従えば、OS３０液は細胞には接触せず、細胞に影響がなく汚染もおこりません。

A.

ガラスボトムディッシュは蛍光顕微鏡に非常に適しています。
重要な性質は次の通りです。
1. 波長が３２０nm以上の入射紫外線は、蛍光を発しません。
2. ３３４、３６５nmの水銀光は、自動蛍光を発しません。
（注：蛍光灯の光がある場合は、最もいい結果を得るには３１３nmより波長の短いフィルターで水銀光を吸収してください.）
3. ２０℃での反射率はnd = 1.5230 ±0.0015です。
4. Abbe No. V = 55.

A.

ガラスボトムディッシュとガラスカバーを注文してください。
P35Gで始まるタイプのディッシュとガラスカバー（品番P35GTOP-0-20-C)を入手してください。
ガラスカバーは７０％エタノールに30分ほど浸して再滅菌して再使用できます。

A.

はい、出来ます。
GSDIM, dSTORM, PALM, TIRFなどの対物レンズの開口数が0.7よりも大きい場合はカバーガラスの
厳密な調整が必須となります。
そのような理由から№1.5のハイトレランス (0.170 ± 0.005 mm)なカバーガラスを使用したディッシュ型番P35G-0.170-14-Cが不可欠となります。

A.

５０ｍｍガラスボトムディッシュ（品番号がP50Gで始まる）は、次のような利点があります。
a)　マイクロインジェクション：
ディッシュの径(50mm)が大きく、サイドウオール(7mm)が低くて細胞に近づきやすい。
ｂ）状態の保持：
５０ｍｍディッシュは、上下のディッシュがピッタリ合うのでインキュベーターから取り出した後、CO2の減少を5％に抑えることが出来る。
これは、長い期間観察する実験には最適です。

A.

殆ど全ての対物レンズには№1.5（0.16-0.19mm)のカバーガラスが適しています。
開口数（NA>0.7）が高くなるにつれ、№1.5の厚さのカバーガラスを使用することがより重要になります。
他のカバーガラスを使用すると光学的歪を起こしたり、結果を得られないこともあります。
※一部のアプリケーションによっては例外もあります。

それらの理由により殆どの顕微鏡観察では№1.5のカバーガラスが使用されています。
超高解像度の顕微鏡技法の為にParts№に0.170がつく№1.5のカバーガラスを取り扱っています。
（例えばP35G-0.170-14-Cなど）。

実際のカバーガラスの厚みとParts№の一覧表は下記の通りです。
 

※P35G-0.170-14-C

A.

どんな接着剤が使用されているかは企業秘密ですが、無毒性のシリコン系のものが使用され、
これは一次神経細胞や多くの特殊な細胞など広く細胞になじむことが示されています。

A.

ガラスボトムディッシュの使用範囲温度は、マイナス２０℃～＋45℃です。ディッシュは５５℃で変形します。従って、ディッシュをオートクレーブにかけることはできません。

A.

MatTekはドイツ製の高品位の硼珪酸ガラスをカバースリップに使用しています。
カバースリップガラスの性質は次の通りです。
●加水分解に非常に強い耐性を示す（加水分解性クラス１）
●優れた化学薬品への耐性
●アルカリの溶出はおよそ１５～２４μg Na2O/g ガラス
●波長が３２０nm以上の入射紫外線は、蛍光を発しません。
（注：蛍光灯の光がある場合は、最もいい結果を得るには３１３nmより波長の短いフィルターで水銀光を吸収してください）。
●２０℃での反射率はnd = 1.5230 ±0.0015です。

A.

ウェルの深さは次の通りです。

A.

ガラスボトムディッシュ・マルチウエルプレートの本体はポリスチレンでできています。
従って、有機溶剤との使用は制限があります。次の化学適合性をご覧ください。
 

A.

全てのガラスボトム製品はFDAで認可された業者でγ線滅菌されています。
通常、2000ケース以上の製品を一度にまとめて滅菌をします。
無菌状態であることは全てのユーザーの絶対条件なので確実に無菌状態にするために、
充分な量のγ線照射をします。
滅菌をしたあとに品質管理規定に従い, ガラスボトム製品に抗生及び抗菌性のものが入っていない培地を
7日間養生して無菌性の検査を行っています。
また、それぞれの箱にはγ線を照射すると赤色に変わるγ線照射インジケーターである赤い丸いシールが貼り付けてあります。

A.

 
型番「P35G-0.170-14-C」のディッシュは通常の「P35G-1.5-14-C」の（カバーガラスの厚み＝ 0.175 +/ 0.015 mm）に対して(カバーガラスの厚み = 0.170 +/- 0.005 mm)のハイトレラランスのカバーガラスを備えています。
高開口数の対物レンズを用いる共焦点、蛍光発光、GSDIM, dSTORM, PALM 、TIRFなどの超解像顕微鏡法では「P35G-1.5-14-C」のディッシュを使用した時に比べて「P35G-0.170-14-C」で観察した方が高画質になります（下記の画像参照）
例えば、「 P35G-1.5-14-C」を使用した定量計測はz-解像度が ± 17.3% (n=5)であったのに対して「P35G-0.170-14-C 」を使用した定量測定ではZ-解像度 は ± 9.5% でした。

A
B

Figure: 改良されたZ軸の解像 –下記A)とB)を使って副解像粒子を観察したところA)P35G-0.170-14-Cに高解像度が確認されました。
A) P35G-0.170-14-C and
B) P35G-1.5-14-C glass bottom dishes.


「175nm PS-Speck」とラベルの貼られたFITC(フルオレセイン）副解像粒子を5ul ガラスボトムディッシュのウェルに入れ乾燥させた後、200ulの水を加えて、オリンパス社のUPLSAPO 60x(NA=1.0)水浸型の対物レンズ を装着したツアイス社の　LSM510　共焦点顕微鏡を使用して粒子を観察しました。

Figures and measurements courtesy of Teemu Ihalainen, Ph. D., University of Jyvaskyla, Finland (2008).

A.

ガラスボトムディッシュ（P35GC-x-xx-C / P50GC-x-xx-F）に使用されているポリ-d-リジンの分子量は7万から１５万ダルトンです。

A.

処理していないガラス及び細胞は両方ともマイナスの電荷を持っています。
ポリリジンは、ガラス表面がプラスの電荷を持つように表面に塗ってあります。
これにより、ガラス表面と細胞間の静電気による吸引力が増加され、細胞の吸着が良くなります。
Poly-D-lysineが好まれる理由は、Ｄ-enantiometer（エナンチオーマー＝鏡像異性体）は
天然型のL-enantiometer（エナンチオーマー＝鏡像異性体）より酵素による破壊がしにくいからです。
これ以外はPoly-L-lysineとPoly-D-lysineの差はありません。

A.

ガラスボトムディッシュP35GCol-x-xx-C / P50GCol-x-xx-Fに使用されているコラーゲンは
Type1 rat tail collagenです。

A.

コーティングは一層コーティングなので、ガラスボトムディッシュの光学的性質には影響がありません。

A.

7mmの測定ホールのガラスボトムディッシュは標準品であります。
(型番 # P35G-1.5-7-C、 P35G-0-7-Cなど)。
30mmの測定ホールの50mm, 60-mm,100-mmディッシュ (型番 #P50G-1.5-30-F, P60G-1.50-30-F, P100G-1.5-30-F) も標準品です。
これらのディッシュでは広範囲で細胞の培養をすることが出来ます。
とても高価な貴重な試薬などを使う時には特注品で5mmの測定ホールのディッシュもご提供することが出来ます。 (型番#: P35G-1.5-5-Cなど)

A.

納期： 特注品は通常、受注後2～3週間以内に作ることが出来ますが、ガラスボトム製品は6週間に一度まとめて滅菌をしています。そのため、滅菌日の都合で3～8週間かかってしまう場合もあります。
（日本からの注文の場合、上記の期間にプラス2～3週間ほどかかります。）
滅菌せずにユーザー様自身で紫外線やエタノールでディッシュを滅菌していただけると
納期は短縮することが出来ます。
（例えば細胞培養フードの中で40分間UVランプで照射するか70％のエタノールに30分間浸漬するなど）

特注料金: 米国規格3箱以上の注文には特注料金はかかりませんが、3箱未満の注文には特注料金が加算されます。※詳細についてはお気軽にお問い合わせください。

A.

はい、取扱っています。
後方散乱光と背景蛍光を最小限に抑えるために, ブラックの96ウェルプレート（型番：PBK96G-1.5-5-F）を取り扱っています。
PBK96G-1.5-5-Fは蓋以外の本体プラスティック部分が黒いほかは標準のクリアな96ウェルプレート（型番：P96G-1.5-5-F)と全く同じ特性を持っています。

注；6ウェル、12ウェル、24ウェル、及び48ウェルのような大きなウェルのプレートには後方散乱光と背景蛍光の問題は生じません。